云南山羊痘流行毒株P32基因的克隆与表达_论文

发布于:2021-07-25 22:52:39

维普资讯 http://www.cqvip.com 2  4 中 国兽 医 杂 志 2 0 0 8年 ( 4 第 4卷 ) 7期  第 云 南 山羊痘 流 行 毒 株 P 2基 因 的克 隆 与 表 达  3 姚  俊 ,李 华 春 ,高 华峰 ,单 于 乃 纯 ,张 念祖  ( 南 省热 带 亚 热带 动 物 病 毒 病 重 点 实 验 室 国家 外 来 动 物 疫 病 诊 断实 验 室 ,云 南 昆 明 6 0 2 ) 云 5 2 4  中 图分 类 号 : 8  Q7 6 文 献 标 识 码 :  B 文章 编 号 :5 96 0 (0 8 0 —0 40  0 2 —0 5 2 0 ) 70 2 —2 山羊痘 是 由 山羊痘 病 毒 引起 的 一种 严 重 的 、 高  1 材 料 与 方 法  1 1 材 料  .  度 接 触 传染 的动 物 疾 病 , 国际 兽 疫局 ( E) 为  被 OI 列 A类 动物 传染病 。临 床上 以体 温 升 高 、 身 性 或 局  全 部性皮 肤痘 疹及 内脏 病变 ( 特别 是肺 ) 至死 亡为 特  乃 征 。山羊痘 病毒 ( P 属痘 病 毒 科脊 索 动物 亚 科  GT V) 羊痘 病毒 属 的成 员 , 属 其 他 成 员 还有 绵 羊 痘 病 毒  该 ( P V) 疙瘩 皮 肤 病 病毒 ( S SP 、 L DV) 3 。P 2抗 原 是 一  种结 构 蛋 白抗 原 , 含有 一个 主要 的抗 原决 定簇 , 包 存  在 于所 有 的羊 痘病 毒属 的 3个成员 中 。针对 山羊痘  病 毒与 副痘病 毒 属存 在 免 疫 交 叉反 应 , 乏有 效 的  缺 鉴别 诊 断试剂 盒 , 研 究 克 隆 表 达 出 羊痘 病 毒 属 特  本 异 的 P 2蛋 白 , 进一 步 研 制抗 体 及抗 原 检 测 试 剂  3 为 盒 奠定前 期工 作基 础 。   收 稿 日期 : 0 7。 3 2 0 一 卜2  1 1 1 山羊 痘病 毒标 准 阳性 血清 , 自中国兽 医药  . .  购 品监察 所 。   1 1 2 质粒 、 肠杆 菌 ( . oi 及 限制 性 内 切酶  .. 大 E c l) p MD1 T P 2 XW ) 组 质 粒 , 克 隆 测 序 时 构 建 。 8 —3( 重 为   P 2基 因 两 端 均 含 有 B mH I、 n  I 切 位 点 。 3 a   Hid I酶 I   p T2 a质粒 、 E 8 DH5 、 L 1DE ) 肠 杆菌 , aB 2 ( 3 大 由云南  农 业 大 学 张 以 芳 教 授 惠 赠 。 B mH I、 id I 、 a   H n  l   l HifI限制 性 内 切 酶 , 自 T Ka a宝 生 物 工 程  n  购 a R ( 连 ) 限公 司 。 大 有   1 1 3 分 子 生 物 学试 剂  质 粒 抽 提 纯 化 试 剂 盒 , ..    Ivto e n i g n公 司 。DNA 凝 胶 回 收 试 剂 盒 、 NA 连  r D 接 试 剂 盒 、 N   re、P G, 生 物 工 程 ( 连 ) D A Makr I T 宝 大   ( a a a 有 限公 司 。P oe   re( w rn e , i TK R ) rti Mak r1  a g )Bo n o   R d公 司 。 a   作 者 简 介 : 俊 ( 9 2) 男 , 理 研 究 员 , 士 , 要 从 事 预 防  姚 1 7- , 助 硕 主 兽医 学研究,-a :  u_ 。 E i y。 n 。h o a.   m l j j  @h m i 。 t l   剞一仆 +卜 { { 书 一 * } } * { { {} * } } . {} {} * . { 廿 } * { _ } 甜I_  — 一 { 廿 { 搿 卜 _ 1 14 检 测用 试 剂  碱 性 磷 酸 酶 标 记 抗 Hi 抗  ..  s 单 { { { { { { { { {卜 仆 } }   } . } } } _ 卜 仆 仆 —  {卜 { {} { * _   }  卜 { { * } } {} {} {} *   . 和A GA 等密 码子 同 时 出现 在 N一 附 * , 可 能是  端 这 影 响 VP 2蛋 白表 达 量 的另 一 个 重 要 原 因_ 。本 试  8   率降到 了最 低 。该 E IA方 法 的成 功 建立 和 应 用 , LS   将对猪 细小病毒病 的预防和控 * 到积极 的作用 。   参 考文 献 :   [] 殷 震 , 景华. 物病 毒 学 [ ] 1  刘 动 M .2版 . 北 京 : 学 出 版 社 , 科   1 97 9 .   验选用 Ro et  作 为表达 菌株 , st a 因为其可 以增 加精  氨酸稀 有 密码子 AGG和 A GA, 亮 氨酸 的密 码子  异 A TA, 氨 酸 的 密 码 子 C 亮 TA 和 甘 氨 酸 的 密 码 子  GGA 和脯 氨酸 的密 码 子 C C 的转 录 , 适合 用 于  C 很 表达 V 2蛋 白, 本 研 究 取 得 成 功 的 主 要 原 因 。 P 是   VP 2基 因获 得 成 功 表 达 的 另 一 个 原 因在 于表 达 系  统 的选择 ,E 系统是 在 大肠 杆 菌 中蛋 白表 达 的首  pT 选表达 系 统 , 过 加 入 I TG 的诱 导 , 系 统 利 用  通 P 该 [ ] J n ta , 2  o ahn Ker . r  R Thp ro id e n megn vrsa l  eav vr a ;a e rig i fmi i u y [] Ifc Di R v 2 0 ,

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